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- Sistema de entrega génica de pBMP-2 baseado em Carbon Dots/Polietilenimina para diferenciação osteogénica de hMSCsPublication . Pedra, Bárbara Micaela Ponte; Castro, Rita Maria de; Tomás, Helena Maria Pires GasparA aplicação da técnica de manipulação génica a células estaminais, tornando possível o controle da diferenciação celular, tem aberto novos caminhos à medicina regenerativa. Neste contexto, uma vez que as células mesenquimais humanas (hMSCs) são difíceis de transfetar, é importante desenvolver estratégias capazes de facilitar esse processo. O objetivo principal desta dissertação foi, pois, desenvolver um sistema, à base de pontos de carbono (carbon dots, CDs) e polietilenimina (PEI) para a entrega do gene da proteína morfogénica do osso-2 (BMP-2) em hMSCs, com a finalidade de induzir a sua diferenciação osteogénica. Este sistema apresenta a vantagem de associar os CDs (nanopartículas fluorescentes que apresentam pequeno tamanho, biocompatibilidade e facilidade de funcionalização) ao PEI (um polímero catiónico amplamente utilizado como sistema de entrega de genes devido à sua capacidade de compactar o DNA e facilitar a sua entrada nas células), tirando partido das qualidades dos dois componentes. Os nanoveículos CDs/PEI formados a diferentes proporções mássicas (1CDs/1PEI, 1CDs/2PEI e 1CDs/4PEI) mostraram capacidade de complexar e neutralizar o DNA plasmídico (pDNA). Os nanoplexos assim formados mostraram, ainda, capacidade de transfetar o pDNA codificante da proteína verde fluorescente e da luciferase (pEGFPLuc), a diferentes razões N/P, tanto em células HEK293T, como nas hMSCs. Adicionalmente, estes nanoplexos foram aplicados ao transporte do gene da BMP-2 em hMSCs e, nas razões N/P10 e N/P15, foi estudada a citotoxicidade e diferenciação osteogénica. Estes estudos mostraram que se obteve transfeção do pBMP-2 com os nanoplexos CDs/PEI em estudo onde, houve um aumento da atividade metabólica ao longo do tempo, propondo a ocorrência da diferenciação celular. Aparentemente, ocorreu uma expressão inicial da BMP-2, suficiente para aumentar a atividade metabólica celular e expressar a ALP no período inicial da diferenciação (7 dias), não sendo claramente evidente, a formação de depósitos de cálcio/fosfato, mesmo após os 21 dias.