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Novos vectores baseados em dendrímeros com aplicações em terapia antisense
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Authors
Abstract(s)
A terapia genética tem se revelado uma ferramenta potente na Medicina, na tentativa de revolucionar o tratamento de várias doenças hereditárias e adquiridas. A introdução de genes em células pretende a
expressão estável e prolongada de proteínas com efeitos terapêuticos.
O silenciamento de genes, através da terapia genética que faz uso de oligonucleótidos antisense, pequenos RNA de interferência (siRNA) ou ribozimas, visa o decréscimo ou anulação do funcionamento de um gene cuja
expressão amplificada, por algum motivo, leva ao desenvolvimento de umapatologia.
A internalização de material genético nas células, usualmente, carece de
métodos e/ou sistemas de entrega (vectores). Estes podem pertencer a duas categorias, designadamente, métodos virais e métodos não-virais. O primeiro é considerado o mais eficiente, apresentando porém, sérias desvantagens como o risco de carcinogénese. A solução é a utilização de métodos não virais,que podem ser físicos ou químicos.
O objectivo principal desta dissertação foi a utilização de dendrímeros para o silenciamento do gene da proteína fluorescente optimizada (EGFP) em
células HeLa, previamente modificadas para expressarem esta proteína.
Dendrímeros poli(amidoamina) geração 5 (PAMAM G5) modificados com 4 ou 8
moléculas de ácidos gordos de diferentes comprimentos foram complexados com oligonucleótidos antisense. A vantagem que estes apresentam em relação aos dendrímeros nativos é que são capazes de interagir com os lípidos da membrana celular, esperando-se, por isso, uma melhor eficiência de
transfecção e efeitos antisense. Isto foi efectivamente verificado, sendo que o
nível de silenciamento do gene da EGFP obtido, está directamente relacionado com o aumento da razão NP, o número e o comprimento das cadeias hidrofóbicas.
O silencimento de genes tem sofrido grandes avanços, havendo actualmente uma série de ensaios clínicos para a sua utilização no tratamento de doenças como cancros de origem hereditária ou viral, prevendo-se que venha para ficar, juntamente com o silenciamento mediado por siRNA.
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Keywords
Terapia antisense Silenciamento de EGFP Oligonucleótido antisense Dendrímeros PAMAM Células HeLa pEGFP Fluorescência Bioquímica Aplicada . Centro de Ciências Exatas e da Engenharia